单分子定位显微镜(SMLM)使高分辨率成像的细胞外囊泡(EVs)。它允许高度精确量化的大小、分子含量和细胞吸收/货物转移过程。雷竞技怎么下载
在这一过程中,SMLM:
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解决单个EVs至关重要的大小和构成回答开放问题研究的电动汽车和理解其潜在的治疗和临床用途。
超分辨率显微镜可以区分膜蛋白和内部货物。它可以确定电动汽车的构成货物。它独特的支持当代电动汽车研究集中在:(1)探索电动汽车在移动通信和扮演的角色(2)背后的分子机制和EV部署,释放,吸收,对细胞的生化功能和行为的影响。
研究人员探索这些主题主要是试图回答两个问题:
在很大程度上,EV子组是由颗粒大小决定的,这也可能在细胞吸收中发挥作用。例如,大小上限为clathrin-mediated EVs的内吞作用是接近200海里。准确和可再生的纳米级测量所有EV组是必不可少的电动汽车和推进我们对电动汽车的理解生物学特征。
SMLM提供了一个独特的分级EVs可靠和实用的方法。它使研究人员能够轻易区分和分类EV粒子和计算粒度分布(PSD)。
SMLM是一个独特的EV成像方法的能力:
雷竞技怎么下载分子货物内容是关键领先的电动汽车研究的兴趣;EV吸收效果的目标细胞的生化功能和行为直接关系到其分子的构成货物。雷竞技怎么下载因此,高度准确的分子内容/组成特征对探索问题至关重要EV-雷竞技怎么下载mediated蜂窝通信的机制。
使用immunofluorescent标识目标膜蛋白和货物,SMLM既能想象和量化特定的膜蛋白和货物确定给定泡构成的分子(如蛋白质、DNA、RNA和脂质)- EV成像的信息,传统的方法无法确定在一个电动汽车的水平。雷竞技怎么下载
考虑到电动汽车可以包含各种货物,正在进行的研究将涉及方法如蛋白质组学或测序与超分辨率显微术结合使用。这些组合的相关协议尤其发现完整的电动汽车的组成由特定的细胞。
导致EV吸收的机制和生物学基础货物转移疾病病理细胞之间可能产生重大影响。我们对这些机制的理解,直到现在,一直受到传统电动车测量技术的功能。
SMLM提供了一致性、分辨率和单分子敏感性需要探测、跟踪和研究电动汽车吸收和货物转移。
它的功能包括:
这些活动可以提供洞察发起和影响选择性的分子机制和条目,条目流程和EVs一旦进入细胞的命运。这样的见解可能导致EV-based疗法的发展为各种疾病(如癌症转移、病毒感染和免疫反应)有更大的效率比目前的治疗选择。
电动汽车数量和货物可能提供重要的各种疾病的病理生理学信息。因此,电动汽车有潜力成为优秀的生物标记,使研究人员能够:
以其独特的组合的功能——特别是探测、分类,大小,数量,跟踪,并确定EVs single-vesicle层面的内容——SMLM是理想的电动汽车研究方法EV-based生物标志物的发现。
SMLM相比,传统的方法测量EVs患有功能性和实用的局限性,可以复杂化,甚至阻止他们的使用,尤其是在新颖应用和探索新的研究问题。
例如,电子显微镜(EM)和衍射极限荧光共焦和宽视野显微镜是行之有效的,并可成像方法单一的电动汽车。然而,尽管他们允许精确的大小与高分辨率的测量,其标签和图像的能力缺乏特定分子的内容。雷竞技怎么下载相反,衍射极限荧光显微镜可以用特异性分子图像内容,但它不能用于精确测量电动汽车的大小。雷竞技怎么下载此外,衍射极限形式不提供必要的决议来评估目标分布在个人电动汽车。
看到完整的表的功能和局限性下面的测量方法。
测量功能 | ||||||||
单囊泡 | 大部分电动汽车 | 囊泡的大小 | 货物 | 目标分布在单一的电动汽车 |
电动汽车在单个细胞 | 精度 | 最低目标大小 | |
超分辨率显微镜/ SMLM |
✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | 高度准确 | 到20海里 | |
纳米粒子跟踪分析(NTA) | ✓ | ✓ | ✓ | 通常高估 |
~ 100 nm | |||
电子显微镜(EM) | ✓ | ✓ | 新兴市场固定< 20 nm可以减少 |
< 20海里 | ||||
可调电阻脉冲传感(tRPS) | ✓ | 通常高估 |
到40海里 | |||||
动态光散射(DLS) | ✓ | 通常高估 |
到50纳米 | |||||
流式细胞术 | ✓ | ✓ | 到50纳米 | |||||
西方墨点法 | 蛋白质只 | |||||||
质量规范 | 蛋白质只 | |||||||
测序(RNA、DNA) | RNA / DNA只 |
SMLM为研究人员提供了一个独特的设备解决方案,对电动汽车的研究。组合的分辨率、精度和功能使高度精确的成像和分析个人电动汽车为了数,尺寸,测量货物,并跟踪特定的电动汽车的命运而不需要额外的工具或方法。
重要的是要注意,合适的超分辨率显微荧光标记的研究确实需要知识潜在的蛋白质含量。这并不存在一个重大障碍SMLM电动汽车研究的应用所有电动汽车似乎有一个或多个tetraspanin家族的蛋白质(如CD9、CD63,研究)膜。这些都是广为接受的,典型的EV标记荧光显微镜研究(包括超分辨率显微术)。
SMLM提供单一测量方法:
可靠地确定电动汽车的类型中创建一个特定的细胞可以通过单分子定位测量的孤立的电动汽车,像那些从培养细胞的细胞外液或存在于体液样本。
是的,SMLM可以用来获得准确的和可再生的纳米级尺寸测量EV组——包括凋亡的身体(500 - 2000 nm直径),微泡(直径100 - 1000 nm)和液(40 - 100 nm直径)。
识别未知蛋白质的电动汽车将需要使用蛋白质组学技术结合超分辨率显微镜。这些组合的相关协议尤其发现的完整构成特定的电动汽车由特定细胞。
它也是有趣的推测序列标签DNA-PAINT等技术,可用于创建多路复用视图的蛋白质在已知的电动汽车,以及提供一个来历不明的电动汽车的筛查工具。核苷酸大分子(DNA或RNA)也可以采用sequence-specific标签oligoSTORM等策略。序列的测定需要;一旦确定,SMLM个人电动汽车的基础上可以使用。
使用immunofluorescent标记目标膜蛋白和货物,SMLM既能想象和标签特定的膜蛋白和确定给定泡构成的分子货物。雷竞技怎么下载对于包含核苷酸的货物,可以使用低聚糖荧光标记。
评估细胞条目及其后果可以通过收购与SMLM完成细胞的高分辨率图像,在文化或组织,紧随其后的是荧光标记单电动汽车与一个已知的成分。这允许研究人员识别和追踪任何特定EV的吸收及其分子货物的命运。雷竞技怎么下载