timsTOF HT

新型質量分析計timsTOF HTは,第4世代の大容量分析計TIMS-XRと先進のデジタイザー技術(ADT)を搭載しています。ハイスループットプロテオミクス実験において,比類のない分析の深さと定量のための広いダイナミックレンジを提供します。timsTOF HTはCCSに完全対応しており，PASEF^®, dia-PASEF^®, prm-PASEF^®を含むすべてのpasef^®取得モ，ドに対応し，4D-Proteomics^™の柔軟性を実現しています。プロテオミクスの深さに妥協することなく，スケ，ルアップを実現します。

“运行&完成”数据库搜索プラットフォームである不是の新機能により,同定の深さとスループットを最大化します。TIMScore^™と蒂姆斯DIA-NNは，ccsを最大限に活用し，より正確なタンパク質同定を即座に行うことができます。

迅速な心臓組織プロテオミクス。短い液体クロマトグラジエントとdia-PASEF^®を用いて，異なる量のマウス心臓プロテオ，ム消化物を3回に分けて分析しました。最大サンプル量において，5桁以上の相対量にまたがる4700のタンパク質群を同定しました。生データはDIA-NNによりライブラリーフリーモードで処理され,タンパク質のコピー数は”プロテオミックスルーラー”アプローチで推定されました。

プロテオ，ム深度をさらに高めるには，タンパク質消化物の量を増やすと同定率が向上します。ヒト細胞株K562 (Promega)のトリプシン消化物を,nanoEluteシステムを用いて,极光カラム(25厘米、75μm ID IonOpticks)で250 nL /分钟,60分の分離時間で分析しました。デ、タはUniProtの予測ラ、ブラリを用いてTIMS DIA-NNで処理しました。

timsTOF HTの30分グラジエントを使用したdia-PASEF^®ベースのアプローチとPQ500 (Biognosys)稳定同位素标准(SIS)の使用を組み合わせました。578年個のタンパク質(804個のペプチドに対応)を,99%以上のデータ完全性で正確に定量することができました。このアプローチは,従来のSMS / MRM法の選択性と感度を,使いやすい取得セットアップと組み合わせたもので,事後的に新しいターゲットを定義することも可能です。

一)TIMS-XRは200 ngを超えるサンプルロードに対して,イオンキャパシティを増加させることが可能です。6900のタンパク質グル，プと86000以上のユニ，クなペプチドを再現性よく同定できます。

B) 1600 ngまでのK562トリプシン消化物のdda-PASEF取得データに対するTIMScore^™搭載PaSERリアルタescム検索エンジンによる同定数。エラ，バ，は5反復の標準偏差を示し，ヒストグラムの上に平均値が表示されています。

PepSep 25シリーズカラム(内径150μm,粒子径1.5μm)を用いて,K562トリプシン消化物(Promega)のサンプルロード1600 ngまで,平均ピーク幅5秒未満を達成しました。グラジエント時間41分は,効率的なペプチド分離に十分であり,高いペプチド負荷量でもグラジエント全体で均一なペプチドの溶出が確認されました。