你的下一个共焦显微镜应该是纸张
纸张荧光显微镜
纸张荧光显微镜的方法是选择长期、高间隔(分钟天)现场样本成像。大多数的模型用于共焦显微镜适用于纸张显微镜。由于其独特的功能,更多的具有挑战性的标本都包含在样本的光谱,可以获得一张光显微镜。
相比共焦激光扫描共焦显微镜旋转的圆盘,纸张显微镜使快速、高分辨率,真正的体积,和深度成像具有以下主要优点:
低光褪色
发出荧光光漂白是指永久损失的能力,由于样品光致荧光团分子的破坏。长期接触光,特别是在延时的研究中,导致光漂白,阻碍荧光分子的检测。
引用
危害,9,et al。(2001)。Autofluorescent蛋白质单分子研究:应用live-cell成像显微镜。Biophys。j . 80: 2396 - 2408。
Im, K.B.,et al。(2013)。扩散和绑定分析点收紧和FCS相结合。血细胞计数89:876 - 889。
参数
- InVi SPIM: 62 x / 1.1 na, 2048×2048像素,像素大小100×100海里,纸张厚度2µm,照明时间每25µs体素
- 旋转磁盘共焦:60 1.2 x / na, 2048×2048像素,像素大小100×100海里,针孔直径50µm或1.5的单位,针孔距离250µm,每体素10µs照明时间
- 与10 k共振扫描共焦:样品形貌;60 x / 1.2 na, 200×200像素,像素大小250海里,针孔直径50µm或1.5的单位,每体素0.5µs照明时间
- 荧光寿命:2.5 ns
- 系统交叉率:2.5·106 s - 1
- 三重态寿命:5µs
- 漂白率:100 s - 1 1千瓦cm-2
比较光漂白的纸张显微镜,旋转的圆盘,共焦显微镜揭示了光漂白的减少使用纸张时显微镜。效果已经明显当成像一个飞机@ 100 fps,但是差异对比成像时尤为惊人的一堆40µm(1µm步骤)@ 100 fps。
低Photo-Toxicity
长期成像可以对样品光毒性的影响,改变细胞的正常行为和整个标本。
纸张显微镜脱颖而出的有效使用兴奋光子,最大限度地减少光毒性的影响。这有助于防止误导的生成和人工的结果。
Jemielita et al .(2013)研究了似乎听不清光毒性的影响长期接触引起的光。纸张的比较显微镜和显微图像旋转的圆盘了不适当的骨骼发育在斑马鱼由于photo-damage旋转磁盘显微镜。
文章来源
Jemielita, m . et al .(2013)比较光毒性斑马鱼颅面骨的开发过程中使用共焦和纸张荧光显微技术。Biophotonics 6 (11 - 12): 920 - 8
时间和空间分辨率高
纸张显微镜使高成像速度和捕获更多的事件的可能性。雷竞技贴吧这是快速发生特殊的意义的动态过程。
Reichmann et al .(2018)的研究进行EMBL的作为一个例子。这表明在第一次在小鼠胚胎细胞分裂,父系和母系的染色体保持分离。只有纸张显微镜使这些发现成为可能。
文章来源
Reichmann, j . et al。(2018)双轴形成受精卵保持亲代基因在哺乳动物早期胚胎。科学,在线发表。
光学切片
光学切片指清晰图像的生成特定的焦平面内的三维结构。好Z决议使样本的三维重建。
荧光显微镜,如共焦显微镜,旋转磁盘共焦和纸张显微镜,使光学切片。共焦显微镜和显微图像特定的焦平面旋转的圆盘通过点扫描样本和拒绝的焦点针孔(s)的荧光信号。这些技术使高分辨率图像采集的photo-damaging效果和/或高时间消费。
纸张显微镜提供了固有光学切片一个特定的焦平面的具体照明。这是通过正交布置的照明和探测以及投影物镜的一层薄薄的纸张样品。固有光学切片法显著减少photo-bleaching光毒性的影响提供了高速采集和可能性进行长期实验。
