多光子显微镜模块

胶片和PLIM模块

先进的荧光和磷光终身成像应用的专用解决方案

关于布鲁克公司的FLIM/PLIM模块

包括突触可塑性在内的许多生物过程都涉及蛋白质之间的动态相互作用。不幸的是,无论是经典的生化方法还是普通的衍射限制荧光显微镜都不能提供所需的灵敏度或分辨率来研究这些亲密的、有时是短暂的相互作用(1)。

对比这些方法,荧光寿命成像显微镜(FLIM)提供关于生物样品的结合、构象和组成变化的信息,这些信息是其他技术无法获得的。它是最严格的测量方法:

  • 雷竞技怎么下载分子环境参数;
  • Fӧrster共振能量传递(FRET)的蛋白质相互作用(2);和
  • 细胞和组织的自身荧光代谢状态(3)。
小鼠上皮的高分辨率双光子激发荧光强度图像。固有NADH荧光为绿色,而角蛋白的自身荧光为红色/黄色。细胞形态可以从NADH信号推断,它主要来自线粒体。数据由阿肯色大学Kyle Quinn博士提供。
发展中的乳腺肿瘤体内NADH成像(MMTV-PyVT小鼠模型)。标签:NADH(红色),GFP-CFMS(绿色),SHG(灰色)。数据由威斯康星大学麦迪逊分校Kevin Eliceiri博士的实验室提供。点击图片查看更多细节。

为此,基于flm的FRET测量了FRET供体与受体相互作用时衰变函数的变化。同样,Autofluorescence FLIM根据相关内源性荧光团衰变参数的改变来区分客观细胞和组织的生物学变化。

同样的,磷光寿命成像显微镜(PLIM)由于最近双光子可激发氧传感探针的发展,PLIM越来越受欢迎(4)。PLIM允许在高空间和时间分辨率下定量测量体内氧气,具有高特异性,这使得它对活细胞和代谢成像非常有用。

数据由波士顿大学安娜·德沃尔博士的实验室提供。点击图片查看更多细节。
数据由波士顿大学安娜·德沃尔博士的实验室提供。点击图片查看更多细节。

FLIM/PLIM模块如何支持高级成像

为了利用这些独特的功能,布鲁克在Becker & Hickl的FLIM系统的基础上开发了FLIM模块。这个模块与布鲁克的所有模块完全集成多光子显微镜系统,而布鲁克公司专有的Prairie View软件可以实现先进的FLIM和PLIM数据采集。

参考文献