Основы Рамановской спектромет ии
Рамановскаявизуализацияосновананасочетаниидвухмощныханалитическихметодов:Рамановскойспектроскопиииоптическоймикроскопии。
Врамановскойспектроскопииинформацияполученнаяпринеупругорассеянноммонохроматическом(лазерном)излучениииспользуетсядляисследованияхимическойприродывещества。АнализметодомРамановскойспектрометриипоумолчаниюявляетсянеразрушающимиблеетогоб,есконтактным。
Основы Рамановской мик оскопи
Традиционнооптическаямикроскопияимеетотношениекизучениюоченьмаленькихобразцов。Представьтесебечтодляанализачастицыдиаметромм1кмприменяетсямикроскопоснащенный100 -кратнымобъективом。
Есливысовместитерамановскийспектрометрсописаннымвышемикроскопом,высможет,епомимопочего,осуществитьхимическийанализэтоймаленькойчастицы。Есливыобъединитеполученныеспектральныеданныесинформациейорасположенииисследуемогообъектавпространствевдвухилитрехизмерениях,мыужебудемговоритьорамановскойвизуализации。
О Рамановской из з за ли ии
Такимобразом,сфокусировавлазерноеизлучениевмаленькомпятнеспомощьюмикроскопавыпоследовательноперемещаетеисследуемыйобразецподэтимпятном。
Взависимостиотразмерашагапредметногостоликавысобираетеспектральнуюинформациюссоответствующимэтомушагупространственнымразрешением。Иесливызададите”сетку”измерения,например,10 x 10мкмвитогевыполучитето,чтомыназываемрамановскимизображением。
Химическоеизображениев(изуализация)содержитинформациюомолекулярномсоставеисследуемогообразцавкаждомпикселе。ВслучаерамановскойвизуализацииэтоозначаетчтокаждыйпиксельсодержитполныйРамановскийспектрвсехкомпонентовобразца。Этоозначает,чтополученноеизображениесодержитмногоспектральныхданныхнаосновекоторыхможнопровестивсестороннийанализ。
Приэтомсозданиеизображенийвконтрастнойцветовойгаммеявляетсястандартнымприложениемвтехслучаяхкогданеобходимоподчеркнутьиохарактеризоватьсвойстваобразца,такиекакхимическаяструктураилисостав。
Втехслучаяхкогдарамановскиемикроскопыиспользуютсядляполучениярамановскихизображений,самапроцедурарегистрацииданныхдостаточнопроста。Рамановскиеспектрысобираютсяизуказанныхточеквпределахопределеннойобластичерезуказанноерасстояни,еприэтомданныезарегистрированныхспектровпривязываютсяксоответствующимточкамобразца。Вэтомпроцесселазерфокусируетсяводнойточкенаобразц,евтовремякакобразецпоследовательноперемещаетсяподлазер,покавсяинтересующаяобластьнебудет«нанесенанакарту»。
Полученнаяпространственнаяинформацияможетбытьодно,двух——илитрехмерной,итакимобразом,реализуетсявозможностьпроведенияхимическихисследованийобразца!Такимобразом,можнополучитьответынаинтересныеаналитическиевопросы,включаяутвержденияободнородностипокрытий,распределениикомпонентовилиинформациюоналичиичастицизагрязнителей。
КаковопространственноеразрешениедостижимоприработенаРамановскихмикроскопах吗?
КонфокальнаяоптикавРамановскоммикроскопеотфильтровываетсобранныйРамановскийсигнал。Следовательно,конфокальнаяапертураконтролируетразмерпятна,скоторогособираетсяРамановскийсигнал,иулучшаетпространственноеразрешение。
Пространственноеразрешениехорошосконструированногоконфокальногорамановскогомикроскопавконечномитогеограничиваетсядифракциейсвета:
Такимобразом,конфокальныйрамановскиймикроскопможетвыполнятьанализиопределениехарактеристикобразцовсточностьюдополовинымикрометра。
Что предст та у л ет собо о к Раманавская виз з за лиза и ?
Рамановскаявизуализация——этометод,которыйгенерируетизображениясодержащиевсебекакспектральнуюинформацию,такипространственныехарактеристикиположенийрегистрацииспектров。Рамановскиеспектрырегистрируютсявразныхточкахобразца,приэтомкаждыйспектрзакреплензасоответствующимпикселемизображения。
НаиболеераспространенныйподходвинтерпретацииРаманаовскогоизображения——использованиеинтенсивностирамановскогосдвига,дающеепредставлениеораспределениихимическихсоединенийиихконцентрации。Интенсивностьнесколькихпиков,сдвигпика,соотношениепиков,ширинапикаит。д。такжеиспользуютсядлясозданияизображенийкомбинационногорассеяниявразличныхсценариях。Значенияпикселейобычноотображаютсякакоттенкисерого,градиентныеиликонтрастныецвета。
СкольковременинеобходимодлясозданияРамановскогоизображения吗?
РегистрацияРамановскогоизображениявключаетвсебянакоплениебольшогоколичестваРамановскихспектров。Следовательно,дляполученияизображения,содержащеготысячиилидажемиллионыспектровкомбинационногорассеяния,общеевремяизмеренияможетбытьзначительным。
Высокаячувствительностьспектрометраимеетключевоезначениеприсозданииизображенийкомбинационногорассеяния,Чемвышечувствительность,темменьшевременинеобходимодлясбораданныхдлякаждогоспектра。Дляувеличенияскоростиполученияизображенийследуетоптимизироватьвыборисследуемогообразца,мощностьлазераиоптическуюэффективностьсистемы。
ПозволяетлиРамановскиймикроскопизмерятьспектрыизглубиныобразца?
Да。КонфокальныйРамановскиймикроскопимеетограниченноедифракциейпространственноеразрешениекакврадиальном,такивосевомнаправлениях。Следовательно,профилированиепоглубинеитрехмерноерамановскоеизображениедоступныдляанализараспределенияхимическихсоединенийподповерхностьюприусловии,чтоматериалнесильнопоглощаетлазерноеирассеянноеизлучение。
МожетлиприменятьсяРамановскиймикроскопдляанализажидкостей吗?
Да。ОднимизосновныхпреимуществРамановскойспектроскопиивотличииотИКспектрометрииявляетсято,чтоводаимееточеньслабыйсигналкомбинационногорассеяния,исоединения,растворенныевводе,могутбытьизмереныбеззначительныхпомех。
Каплюраствораможнопростопоместитьиизмеритьнапредметномстекле。Дляизмерениялегколетучихобразцовмогутбытьиспользованыкварцеваякюветаиливогнутыепредметныестекласкварцевымпокровнымстеклом。