timsTOF HT
高通量4 d-proteomics™
高动态范围和定量精度
Основныемоменты
扩展高通量4D-Proteomics™的能力
Особенности
基于TIMS的离子迁移分离和ccs启用分析
新型timsTOF HT质谱仪配备了第四代高容量TIMS-XR分析仪和先进的数字化技术(ADT)。它提供了更高的动态范围，在高通量蛋白质组学实验中无法比拟的分析深度和定量。timsTOF HT完全启用ccs并支持所有PASEF®采集模式包括PASEF®, dia-PASEF®和prm-PASEF®实现4D-Proteomics™的灵活性。仅仅是不妥协的蛋白质组深度。
Применения
使用dia-PASEF进行快速组织蛋白质组分析®
快速心脏组织蛋白质组学。用短液相色谱梯度和dia-PASEF对不同量的小鼠心脏蛋白质组消化物进行三次重复分析®．在最高样本负荷下，我们共鉴定出4700个蛋白质组，其相对丰度超过五个数量级。在无库模式下使用DIA-NN处理原始数据，并使用“蛋白质组学标尺”方法估计蛋白质拷贝数。
“组织分析是临床蛋白质组学的一个关键领域，但由于组织切片和活检包含大量异质细胞群，因此极具挑战性。的dia-PASEF®timsTOF HT仪器的采集模式可以在大动态范围内量化蛋白质，即使是在心脏组织等臭名昭著的困难样本中，也不会牺牲通量或灵敏度。”
迪亚- pasef细胞系空前深度®，蒂姆斯·黛安娜和帕瑟
对于更高的蛋白质组深度，增加蛋白质消化负荷可以提高识别。采用nanoElute系统，以250 nL/min的速度，在Aurora色谱柱(25cm, 75 μm ID, IonOpticks)上分离60 min，对人细胞系K562 (Promega)的tryptic文摘进行分析。timsTOF HT操作在dia-PASEF®模式使用100毫秒TIMS分离。使用来自uniprot(人工审查)的预测库，使用TIMS DIA-NN处理数据。
靶向血浆蛋白质组学:用30分钟梯度量化550多种蛋白质
我们将PQ500 (Biognosys)稳定同位素标准(SIS)与dia-PASEF结合使用®基于方法，在timsTOF HT上使用30分钟梯度。578个蛋白质(对应804个肽)能被准确定量，数据完整性为> 99%。该方法将传统SMS/MRM方法的选择性和敏感性与易于使用的采集设置相结合，还允许后验定义新目标。
纳米LC柱在更高的样品负载下获得最佳结果
A) TIMS-XR允许在样品负载超过200 ng时增加离子容量。可重复识别~ 6900个蛋白质组和超过86000个独特肽。
B)使用PaSER实时搜索引擎的识别数量TIMScore™用于dda-PASEF高达1600 ng K562胰蛋白酶消化。误差条表示5次重复的标准偏差，上面的直方图显示平均值。
使用PepSep 25系列色谱柱(ID为150 μm，粒径为1.5 μm)，对K562 tryptic digest (Promega)样品负载达到1600ng，平均宽度小于5秒。41分钟的梯度时间对于高效的肽分离是足够的，即使在高肽负荷下，也可以通过梯度均匀地洗脱肽。
Отзывы
“我们正在与Bruker合作，将DIA-NN定制为dia-PASEF的精简处理工具®以CCS为重点的数据已经得到了回报。它简化和加速识别和量化成千上万的蛋白质在非常短的梯度。我们很高兴在与Bruker的密切合作中，名为TIMS DIA-NN的供应商集成版本现在成为PaSER生物信息学平台的一部分。”
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Специалист
仅供研究使用。不用于临床诊断程序。